一、染色原理

苏木精 — 伊红染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ，简称HE染色法 ，石蜡切片技术里常用的染色法之一 。苏木素染液为碱性 ，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核酸着紫蓝色 ；伊红为酸性染料 ，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色 。

二、染色步骤

石蜡切片组织包埋，切片和HE染色

1.取新鲜组织厚度不超过5mm，置于4%多聚甲醛或者10%的中性福尔马林固定大于48h后，取出置于包埋盒中，并用铅笔做好标记；

2.固定后自来水冲洗1-2h；

3.脱水透明 --二甲苯(10min)→二甲苯(20min)→无水乙醇(5min)→95%乙醇(5min)→90%(5min)→85%乙醇(5min) →80%乙醇(5min) →75%乙醇(1h) →85%乙醇(1h) →90%(3次，共1h) →95%乙醇(3次，共1h) →无水乙醇(3次，共1h) →二甲苯（2次，共1h）；

4.石蜡浸泡，3次，共2h，最后将包埋盒置于新蜡中用包埋机包埋；

5.包埋结束后，待蜡块冷却后，将蜡块置于冰上，于切片机上切片，切片厚度一般为4-5um。漂片温度为42℃，摊片温度为65℃左右，待切片上多余的石蜡烤干后，将切片置于切片盒中室温保存；

6.石蜡切片放置在60℃恒温箱中烘烤2-3h，防止脱片；

7.脱蜡和水化：二甲苯(10min)→二甲苯(20min)→无水乙醇(5min)→95%乙醇(5min)→90%(5min)→85%乙醇(5min) →75%乙醇(5min)；

8.蒸馏水冲洗2次5min；

9.Mayer氏苏木素，1min；

10.自来水冲洗，5-10min；

11.75%盐酸酒精，1-2min，自来水冲洗30s；

12.伊红复染1-2min，自来水冲洗30s；

13.脱水、透明，步骤2反向进行；

14.封片：中性树脂，加盖玻片(组织部位切勿残留小气泡)，自然晾干。

三、染色结果

细胞核内的染色质与胞质内的核酸着紫蓝色，细胞质和细胞外基质中的成分着红色 。

转自：“精英汇科研服务”微信公众号

如有侵权，请联系本站删除！