提取完DNA或RNA之后，通常需要测浓度，这也是质检的主要方法。在分光光度计上进行的吸光度测量包括样品中在不同波长处吸收的所有分子的吸光度。由于核苷酸、RNA、单链DNA和双链DNA都在260 nm处吸收，因此它们将检测样品的总吸光度。观测指标也就是260/280 and 260/230 Ratios，所以下面分别介绍：

260/280 Ratio

260 nm和280 nm处的吸光度比用于评估DNA和RNA的纯度。通常认为~1.8的比例是DNA的“纯”比例；一般认为~2.0的比率为RNA的“纯”。如果这两种情况下的比率明显较低，则可能表明存在蛋白质、苯酚或其他污染物，这些污染物在280 nm处或附近强烈吸收。

260/230 Ratio

这个比率被用作核酸纯度的第二个衡量标准。“纯”核酸的260/230值通常高于相应的260/280值。预期的260/230值通常在2.0-2.2范围内。如果该比率明显低于预期，则可能表明存在在230 nm处吸收的污染物。

图1 核酸的典型光谱模式

图2 EDTA光谱模式（碳水化合物和苯酚的吸光度都在230nm附近。）

图3 TRIZOL光谱模式（TRIZOL试剂是一种酚类溶液，在230 nm和~270 nm的紫外线下都能吸收。）

图4 Guanidine HCl光谱模式（用于DNA分离的盐酸胍将在约230 nm处吸收）

图5 Guanidine Isothiocyanate光谱模式（用于RNA分离的异硫氰酸胍将在约260 nm处吸收）

来源：今日之森

转自：“MDL科研助手”微信公众号

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