免疫组织化学(Immunohistochemistry, IHC)技术是根据抗原抗体反应原理而发展起来的染色技术，即抗原与抗体特异性结合后再通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及相对定量的研究，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。

免疫组织化学技术的原理

根据抗原抗体反应和化学显色原理，组织切片或细胞标本中的抗原先和一抗结合，再利用一抗与标记生物素、荧光素等的二抗进行反应，前者再用标记辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（ALP或AKP）等的抗生物素（如链霉亲和素等）结合，最后通过呈色反应或荧光来显示细胞或组织中化学成分，在光学显微镜或荧光显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物，从而能够在细胞爬片或组织切片上原位确定某些化学成分的分布和含量。

免疫组织化学技术的分类

免疫组织化学技术按照标记物的种类可分为免疫荧光法、免疫酶法、免疫铁蛋白法、免疫金法及放射免疫自显影法等。

这些常用免疫组织化学方法的原理如下：

01

免疫荧光细胞化学技术

将已知抗体标上荧光素,以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原,在荧光显微镜下观察.当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后会发出一定波长的荧光,从而可以确定组织中的抗原定位或定量。

02

免疫酶标技术

是免疫组织化学研究中最常用的技术．基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，通过光镜或电镜，对细胞或组织内的相应抗原进行定位或定性研究。

03

免疫胶体金技术

就是用胶体金标记一抗，二抗或其他的能特异性的结合免疫球蛋白的分子（如葡萄球菌A蛋白）等作为探针对组织或细胞内的抗原进行定性，定位或定量研究．由于胶体金的电子密度高，多用于免疫电镜的单标记或多标记的定位研究。

免疫组织化学技术的标本

实验所用主要为组织标本和细胞标本两大类，前者包括石蜡切片（病理切片和组织切片）和冰冻切片，后者包括组织印片、细胞爬片和细胞涂片。

其中石蜡切片是制作组织标本最常用、最基本的方法，对于组织形态保存好，且能作连续切片，有利于各种染色对照观察；还能长期存档，供回顾性研究；石蜡切片制作过程对组织内抗原暴露有一定的影响，但可进行抗原修复，是免疫组化中首选的组织标本制作方法。

免疫组织化学技术的抗体

免疫组化实验中常用的抗体为单克隆抗体和多克隆抗体。

单克隆抗体是一个B淋巴细胞克隆分泌的抗体，应用细胞融合杂交瘤技术免疫动物制备。

多克隆抗体是将纯化后的抗原直接免疫动物后，从动物血中所获得的免疫血清，是多个B淋巴细胞克隆所产生的抗体混合物。

免疫组织化学技术临床应用

Part.1 恶性肿瘤的诊断与鉴别诊断

比如肺腺癌与肺鳞癌的鉴别。TTF-1（图1）/P63（图2） 组合基本可以满足对肺鳞癌和肺腺癌的鉴别。

图1：TTF-1在肺腺癌中的表达 图2：P63在肺鳞癌中的表达

Part.2 确定原发部位

确定转移性恶性肿瘤的原发部位。比如确定肺原发性腺癌与转移性腺癌一般而言，转移到肺的腺癌以乳腺癌、胰腺癌、前列腺癌、子宫颈腺癌、子宫内膜癌、结肠腺癌及间皮瘤多见，通常转移瘤与原发瘤具有共同的抗原表达。

图3：免疫组化多种抗体组合在确定原发部位的应用

Part.3 病理分型

对某类肿瘤进行进一步的病理分型。比如乳腺癌病理分型（图4），通过ER、PR、HER-2、Ki-67表达情况来细分。

图4：ER、PR、HER-2、Ki-67在乳腺癌病理分型的应用

Part.4 软组织肿瘤

软组织肿瘤的治疗一般需根据正确的组织学分类（图5），因其种类多、组织形态相像，有时难以区分其组织来源，应用多种标志进行免疫组化研究对软组织肿瘤的诊断是不可缺少的。

图5：①平滑肌瘤Actin表达；②、③是恶性纤维组织细胞瘤，其中②显示AAT表达，③显示CD68表达；④、⑤、⑥横纹肌肉瘤，细胞比较密集，胞浆比较少，其中⑤显示Myogenin表达，⑥显示MyoD1表达，因此可以确定这个细胞是一个来源于横纹肌细胞的肿瘤

Part.5 微小转移灶

发现微小转移灶，有助于临床治疗方案的确定，包括手术范围的确定。比如应用上皮细胞相关抗【CK（图6）/EMA/CEA等】检测淋巴结、骨髓内的微小转移性癌细胞。

图6：CK在淋巴结中的表达

Part.6为临床提供治疗方案的选择

比如ALK（图7） 在非小细胞肺癌中的应用，指导靶向药物的使用。

图7：ALK在非小细胞肺癌中的表达

文章来源于检验科

转自：“博舜科研”微信公众号

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