一、染色原理

BrdU(5-溴脱氧尿嘧啶核苷)是胸腺嘧啶的衍生物，常用于标记活细胞中新合成的DNA，可代替胸腺嘧啶选择性整合到复制细胞中的新合成的DNA(细胞周期S期);随着DNA复制进入子细胞中，BrdU特异性抗体可以用于检测BrdU的渗入，从而判断细胞的增殖能力。

二、染色步骤

1.4%多聚甲醛固定10分钟；

2.用2N HCl（浓盐酸：水=1:6）在37°C孵育30 min使核酸变性，暴露BrdU结合稳点；

3.用PBS洗3次，每次5 min；

4.用含5% FBS的封闭液（Blocking buffer）常温下封闭1 h；

5.4 ℃下孵育一抗BrdU与其他合染抗体过夜；

6.常温下PBS洗3次，每次5 min；

7.常温下孵育荧光二抗（1：1000）2 h;

8.PBS洗3次，每次5 min；

9.用5 μg/mL DAPI工作液在常温下孵育5min；

10.再用PBS常温下洗3次，每次5 min；

11.抗瘁灭剂封片剂封片，37°C烘箱中稍作烘干直到盖玻片不自行滑动；

12.普通荧光显微镜或激光共聚焦显微镜采集图片。

三、案例展示

转自：“精英汇科研服务”微信公众号

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