小胶质细胞是脑内主要的免疫效应细胞，约占脑内全部胶质细胞的5%，是定居在脑内的吞噬细胞，具有内源性免疫防御功能。其活化后所介导的炎症反应会导致神经元逐渐退化甚至死亡，最终导致脑部疾病。

小胶质细胞与脑缺血/再灌注损伤、阿尔茨海默症、帕金森病、神经病理性疼痛等其他中枢神经系统疾病的发生、发展过程紧密相关。

细胞特点：小鼠小胶质细胞（BV2）为上皮细胞样生长的半贴壁半悬浮细胞。

常见的小胶质细胞培养方法主要有胰酶消化法、差速贴壁法、营养剥夺法、低速震摇法、手动振摇法以及利多卡因处理法。

应用方向

1.免疫调节

2.神经回路建立

3.多巴胺能神经元轴突生长发育及迁移

4.突触密度与稳态

神经炎症和免疫调节研究：利用BV2细胞进行神经炎症研究时，需要注意细胞的活性和纯度，以及选择适当的刺激因素和检测方法。关注BV2细胞在炎症环境下可能出现的形态和功能变化，以便更准确地模拟和解释实验结果。

神经退行性疾病研究：在阿尔茨海默病、帕金森病等神经退行性疾病中，BV2细胞可以分泌炎症因子和神经毒性物质，导致神经元死亡。进行此类研究时，需要注意细胞的来源和鉴定，以及模拟疾病模型的实验条件。关注BV2细胞在疾病模型中的表型变化和功能异常，以便更准确地模拟和解释实验结果。

药物筛选和毒性测试：BV2细胞可用于药物筛选和毒性测试，以发现具有潜在治疗作用的药物或筛选出对神经系统有害的药物。进行药物筛选时，需要注意药物的浓度和作用时间，以及选择适当的检测方法和评价指标关注BV2细胞在不同药物刺激下的反应差异和特异性。

案例分析

1. 模型建立

① Control 组 （BV2细胞）；

② Model组（BV2细胞血清饥饿4h + IFNγ（10ng/mL）+ LPS（10ug/mL）共48h。

其他造模方法：(不同生长因子、不同干预浓度、不同诱导时间)

① LPS

② LPS + IFNγ

③ IL-4

④ IL-4 + IL-10

⑤ TNF-α + IFNγ + IL-1β

......

2. 操作注意事项

①培养体系：DMEM培养基, 10%胎牛血清，1% P/S。

②培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%；温度：37℃。

③传代比例：1:2-1:4。

④传代方式：悬浮细胞直接吹打收集，贴壁细胞胰酶消化3-5分钟。

⑤换液频率：每1?2d换液一次。

⑥冻存条件：无血清细胞冻存液；温度：液氮。

3.模型评价

① 形态学观察

激活的BV-2小胶质细胞胞体增大、突起变短、细胞形态呈圆形或杆状；进一步被激活时，细胞突起消失、细胞形态呈阿米巴状。

（胞体增大、突起变短或消失，细胞形态呈圆形或杆状）

② 确定极化类型（M1 、M2）

Elisa检测TNF-α、IL-12、IL-10；

与C组相比，M组TNF-α、IL-12上升、IL-10无显著变化，即为M1型极化；

与C组相比，M组TNF-α、IL-12无显著变化、IL-10上升，即为M2型极化。

流式检测CD80、CD86、CD206、CD163

4. 风险评估

1、不同细胞造模成功率会有差异，此模型药物干预浓度、时间等均可根据实际结果进行优化；

2、不同生长因子导致的极化类型不一样，需合理选择检测指标。

转自：“晶莱生物”微信公众号

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