艰难梭菌广泛存在于在人类和动物的肠道以及环境中，是导致抗生素相关腹泻的主要病原菌。艰难梭菌感染（CDI）表现为一系列临床症状，从轻度腹泻和发烧到重度的中毒性巨结肠、肠穿孔甚至死亡。值得注意的是，艰难梭菌在人群中的定植率在 4% 到 71%之间变化。而近年来，艰难梭菌定植（CDC）倍受关注，其可能促进医疗相关的 CDI 传播，并存在定植者自身进展到CDI的风险。因此，临床诊断过程中如何精确甄别 CDI和 CDC 是一个关键的挑战，这决定了后续是否需要接受抗生素治疗。

目前艰难梭菌的实验室检测主要包括产毒培养，细胞毒性试验，PCR，酶联免疫试验等。实时细胞分析系统（RTCA）是一种以电极阻抗传感器为原理的新型细胞检测技术，具有高通量，高灵敏，半自动等特点。该系统能实时监测细胞增殖以及毒素等诱导的细胞凋亡与脱落，并以细胞指数的形式记录。早期已有研究将 RTCA 系统应用于临床 CDI 样本中功能性细胞毒素 B（TcdB）的定量检测，并作为临床伴随性诊断用以评估临床 CDI 的严重程度。

2024年1月23日，杭州医学院金大智研究员团队在 Frontiers in Microbiology 期刊在线发表题为：Rapid discrimination between clinical Clostridioides difficile infection and colonization by quantitative detection of TcdB toxin using a real-time cell analysis system 的研究论文（点击文末”阅读原文”）。

该研究首次通过 RTCA 系统检测临床 CDC 与 CDI 样本，发现了两者功能性 TcdB 的差异，并作为有效甄别临床艰难梭菌定植和感染的重要因素。

研究采用 RTCA 系统检测无症状 CDC 携带者以及临床确诊为 CDI 的住院患者粪便样本，并将细胞指数下降 50% 作为阳性截断点，通过建立不同浓度 TcdB 毒素标准品的拟合曲线，确定临床样本中功能性 TcdB 的含量（并使用 TcdB 中和抗体确保特异性）。结果发现，CDI 患者中功能性 TcdB 含量显著高于无症状 CDC 携带者。

同时，研究进一步将 RTCA 结果与 PCR 和 ELISA 的检测结果进行对比分析，强调了在 CDC 与 CDI 之间功能性 TcdB 存在显著差异，而艰难梭菌 tcdB 基因载量以及总TcdB 蛋白的表达量并无差异。对此，研究者将 CDC 样本上清过滤并与纯化 TcdB 毒素共孵育，经 RTCA 系统检测发现纯化 TcdB 的毒素活性在一定程度上被抑制。

研究者提出，RTCA 系统是有效甄别临床 CDC 和 CDI 的有力工具。未来将进一步评估 CDC 粪便样本中抑制的 TcdB 活性的物质，并将 TcdB 滤过处理的 CDC 样本接种到 CDI 样本中，对 RTCA 测定的功能性 TcdB 浓度进行比较分析。同时结合核酸适配体技术来捕获 TcdB 蛋白，简化检测过程。

论文链接：

https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fmicb.2024.1348892/full

转自：“学术观察”微信公众号

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