该研究开发了含Cas9目标序列的单链DNA (single-stranded DNA，ssDNA) 同源定向修复(homology-directed repair，HDR)模板，描述了将修饰的Cas9酶附着在单链模板DNA上的方法，即末端添加一个小的双链DNA悬吊物。与之前的高浓度双链DNA (double-stranded DNA，dsDNA)方法相比毒性较低，因此将敲入效率和产量平均提高约2-3倍，提供了一种低毒性、高效的CAR-T细胞制造方法。

这项技术于不久前发表在《Nature Biotechnology》，文章还展示了这种方法在罕见遗传性免疫疾病相关的两个基因——IL2RA和CTLA4基因替换策略中的应用，以及使用新的DNA模板生成了超过10亿个靶向多发性骨髓瘤的CAR-T细胞。

研究人员目前正在尝试获得批准，以推进在CAR-T细胞疗法和IL2RA缺乏症治疗中使用该项CRISPR技术的临床试验。

文献原文：

High-yield genome engineering in primary cells using a hybrid ssDNA repair template and small-molecule cocktails

转自：“科研腔”微信公众号

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