如何选择正确的抗体

1、蛋白的名称和亚型

经常拿到一些“似是而非”的英文名称或简称，查的时候不确定推荐的是否就是要检测的靶标。针对这个问题，建议大家参考uniprot蛋白数据库，大部分抗体说明书的 “数据库链接”部分，有针对不同种属的基因和蛋白数据库链接， 其中显示SwissProt的就是该蛋白的数据库链接，点击进去后，页面的左边有筛选框，可以点击感兴趣的部分查看。

点击Names&Taxonomy部分，可以看到该靶标的基因名称和蛋白名称，以及替代名称，也就是所谓的别名，可以核对名称是否可以对应上，如此判断该抗体是否适合。

另外，关于蛋白亚型问题，在这里也可以找到答案，点击Sequences部分，可以看到该蛋白有几个亚型，每个亚型的具体氨基酸序列和分子量大小，如果做WB实验，就可以预估条带位置。

不能不说，SwissProt数据库实在太强大了，常问到的亚细胞定位-Subcellular location，翻译后修饰-PTM/Processing部分，具体的修饰位点和修饰基团等，都可以一一查看到。

5、制备抗体的免疫原

在说明书中的免疫原，即Immunogen 部分，经常如下描述，Synthetic peptide within Human X aa 200-250. The exact sequence is proprietary.或者Recombinant full length protein corresponding to X（这里的X指的是蛋白的名称）.建议您根据您的实验目的，去选择合适的抗体，如果您没有特殊实验要求，那么全长的免疫原序列是不错的选择。

5、单克隆抗体和多克隆抗体

经常有用户问到，单克隆还是多克隆抗体好？其实在回答这个问题前，我们要先解释下这两者的含义，简单来讲，单克隆抗体只能识别抗原的特定抗原表位，而多克隆抗体可以识别抗原的多个抗原表位，所以，单克隆抗体特异性高而灵敏度相对低一些，多克隆灵敏度高而特异性低一些，在不同实验操作时，可以根据如下表格有侧重选择。

7、抗体的克隆号

克隆号是给单克隆杂交瘤细胞产生的抗体的编号。每个杂交瘤细胞克隆产生单个纯同质型抗体。克隆号相同的抗体代表制备抗体时的免疫原序列是相同的。

8、抗体的偶联物

常见的偶联物有酶、荧光素、生物素等，常见的酶有辣根过氧化物酶-HRP、碱性磷酸酶-AP等，常见的荧光素有传统荧光素FITC、APC、Pe、Pe-cy3、Pe-cy5等，新型荧光素包括Alexa Fluor? 系列和DyLight? 系列各波长的荧光素，一般做多重免疫染色时，会考虑选择直接标记荧光素的一抗，建议您先核实实验室仪器的荧光显微镜或流式细胞仪的配置，选择匹配仪器的激发波长或通道的荧光抗体，尽量避免光谱重叠。

如果您需要寻找双标记和三标记免疫荧光染色实验中的常见组合，我们推荐如下：

9、抗体验证

这里我们重点说下目前有说服力的基因敲除验证，即KO验证，该方法使用单倍体细胞模型的 CRISPR/Cas9 KO 人类细胞系。敲除模型是真正意义上的阴性对照，是抗体验证的标准品。

转自：“医学科研小坑”微信公众号

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