经常能看到实验室新来的师弟垂头丧气的，经过询问才知道。他的 WB 实验总是出现各种各样的问题。今天一进实验室，又听到他在哀嚎：我的实验又又又失败了！

原来这次是因为又没跑出阳性条带……

WB 实验步骤多，耗时长，任意一个步骤出现纰漏，都有可能导致结果的失败。那么今天就从几个阶段简单了解一下，到底都有哪些原因会导致实验结果无信号、没有阳性条带？

01-实验开展前

需要充分了解靶标蛋白的时空表达情况，以此确保实验方案的正确性。

02-实验进行中

样本采集和制备：低温环境，样本充足是基本。制备完成后，尽快实验才能保证样本质量。

电泳转膜：转膜需充分，缓冲液最好现配，选择孔径大小合适的膜。另外可利用丽春红染膜（可逆）和考马斯亮蓝染膜（不可逆）来判断转膜是否成功。

一抗、二抗孵育：确保一抗未失效；选择与一抗相匹配的二抗类型（两者宿主的物种相同）。

03-实验做完后

根据蛋白丰度选择合适的 ECL 检测试剂盒，显影液过期或者错误配置，都有可能导致实验结果无条带。

看似问题很好解决，然而在实际操作中，繁琐的步骤会导致实验结果千奇百怪……不是阳性条带信号弱，就是条带位置异常，昨天的结果高背景，今天又出现了非特异性条带。

转自：“丁香学术”微信公众号

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