本次推文内容借鉴自：文章Feiyiliu Mixture sensitizes EGFRDel19/T790M/C797S mutant non-small cell lung cancer to osimertinib by attenuating the PRC1/Wnt/EGFR pathway

2.1 FYLM煎剂的制备

FYLM由十种中草药组成，包括 黄芪18克、半枝莲24克、白竹12克、白花蛇舌草(野生)20克、人参9克、茯苓15克、 浙贝母15克、山茱萸20克、薏苡仁20克和甘草6克。所有的中国药片由亳州药业有限公司提供，并由山东中医药大学教授验证。对于体内动物研究，所有草药(共159克)在10倍的冷蒸馏水中浸泡1小时，然后 煎煮40分钟。过滤后，将药渣捞出，汤剂再用8倍蒸馏水煎煮备用。两种滤液合用后，取FYLM煎液浓缩到66毫升在旋转蒸发器。最后，取2.4 g(生药)/ml FYLM汤，存储温度为- 20℃。

2.2 UPLC-Q-Orbitrap-MS分析

采用UPLC-Q-Orbitrap-MS色谱仪串联Q型高分辨率质谱仪[赛默飞世尔科技(中国)有限公司]检测FYLM汤的成分分析。将1 ml 80%的甲醇与200 μl的FYLM溶液混合，并旋转10分钟。在4 °C 以20,000 g 离心10分钟后，将上清液过滤用于随后的研究。在35 °C 的 AQ-C18柱(150mm × 2.1 mm，1.8 μm，Welch)上进行色谱分析，注射体积为5μl。色谱梯度洗脱程序: 98% 水相，1分钟2% 有机相; 80% 水相，5分钟20% 有机相; 50% 水相，10分钟50% 有机相; 15分钟20% 水相，80% 有机相; 20分钟5% 水相，95% 有机相; 27分钟5% 水相，95% 有机相; 28分钟98% 水相，2% 有机相; 30分钟98% 水相，2% 有机相。质谱分析使用全质量/dd-MS2检测方法进行，阳性和阴性离子开关扫描。从高分辨率液体质量收集的数据最初用 CD2.1(Thermo Fisher)进行分析，然后与数据库(mzCloud)进行比较。

2.3 FYLM 含药血清的制备

20只雄性 Sprague-Dawley 大鼠(体重180 ± 10g)购自北京维特河实验动物技术有限公司[动物许可证号: SCXK (京)2016-0006]。将动物饲养在23°C±2°C的12/12小时光/暗循环中，50% -60% 的相对湿度和不含特定病原体[实验室使用动物许可证号: SYXK (鲁)2017-0022] ，免费获得食物和水。

在适应性喂养1周后，将动物随机分为对照组和FYLM给药组。FYLM 成人临床剂量为159g/60kg，大鼠灌胃剂量为体表面积临床剂量的6.3倍。FYLM 给药组大鼠灌胃给予 FYLM，剂量为16.7 g/kg。对照组给予生理盐水灌胃(1.5 ml/100g 体重)。连续灌胃6天后，用3% 的戊巴比妥(45mg/kg，腹腔注射)麻醉大鼠(Sun et al。，2004) ，从腹主动脉收集血液。在室温下休息1小时后，通过在4 °C 以3000rpm 离心15分钟获得血清，然后在57 °C 的水浴中灭活30分钟。之后，通过0.22 μm 微孔膜过滤除去细菌，并储存在 -80 °C 的冰箱中进行体外实验。

转自：“如沐风科研”微信公众号

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