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  • 基础医学实验(十八)——RIP

    阅读: 2022/12/28 13:55:06

    实验原理

    RIP技术(RNA Binding Protein Immunoprecipitation,RNA结合蛋白免疫沉淀),是研究细胞内RNA与蛋白结合情况的技术。其原理包括:用特异性抗体或表位标记物捕获细胞核内或细胞质中内源性的RNA结合蛋白→清洗磁珠,防止非特异性的RNA的结合→RNA结合蛋白及其结合的RNA共沉淀,进行RNA纯化→结合的RNA序列通过RIP-ChIP,定量PCR和高通量测序鉴定。

    实验步骤(磁珠法)

    具体实验步骤参考Milipore RIP试剂盒说明书

    (1)裂解产物的配制

    (2)用于免疫沉淀的磁珠配制

    (3)RNA结合蛋白-RNA复合物免疫共沉淀(RIP)

    (4)RNA的纯化

    (5)Input RNA的质量评估(可选)

    (6)免疫沉淀RNA的分析

    转自:“精英汇科研服务”微信公众号

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